Javascript dia tsy mandeha amin'izao fotoana izao ao amin'ny navigateur.Rehefa tsy mandeha ny javascript dia tsy mandeha ny fiasa sasany amin'ity tranokala ity.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Departemantan'ny Siansa, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Espaina. fandraisana anjara: Ny asidra hyaluronika (HA) dia polysaccharide voajanahary ampiasaina amin'ny famokarana famenoana hoditra ho an'ny tanjona ara-esthétika.Koa satria manana antsasaky ny androm-piainany ao amin'ny vatan'olombelona izy, dia ovaina amin'ny fomba simika ny famenoana hoditra mifototra amin'ny HA mba hanitarana ny androm-piainany ao amin'ny vatana.Ny fanovana mahazatra indrindra amin'ny famenoana mifototra amin'ny HA ara-barotra dia ny fampiasana ny 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) ho toy ny mpandraharaha crosslinking mba hampifandray ny rojo HA.Ny BDDE sisa tavela na tsy mihetsika dia heverina fa tsy misy poizina amin'ny <2 ampahany isaky ny tapitrisa (ppm);noho izany, ny BDDE sisa tavela amin'ny famenoana dermal farany dia tsy maintsy isaina mba hiantohana ny fiarovana ny marary.Fitaovana sy fomba: Ity fandalinana ity dia mamaritra ny fitadiavana sy ny famaritana ny vokatra avy amin'ny fanehoan-kevitra mifamatotra eo amin'ny BDDE sy HA eo ambanin'ny fepetra alkaline amin'ny alàlan'ny fampifangaroana ny chromatography ranoka sy ny spectrometry faobe (LC-MS).Vokatra: Taorian'ny famakafakana samihafa, dia hita fa ny toetry ny alkaline sy ny mari-pana ambony ampiasaina hanadiovana ny hydrogel HA-BDDE dia nampiroborobo ny fiforonan'ity vokatra vaovao ity, ilay fitambarana "propylène glycol-like".Ny famakafakana LC-MS dia nanamafy fa ny vokatra avy amin'ny vokatra dia manana faobe monoisotopika mitovy amin'ny BDDE, fotoana fitehirizana hafa (tR), ary fomba fiasa UV hafa (λ=200 nm).Tsy toy ny BDDE, dia voamarika tamin'ny famakafakana LC-MS fa eo ambanin'ny fepetra fandrefesana mitovy, ity vokatra ity dia manana taham-pikarohana avo kokoa amin'ny 200 nm.Famaranana: Ireo vokatra ireo dia manondro fa tsy misy epoxide ao amin'ny firafitry ity fitambarana vaovao ity.Misokatra ny fifanakalozan-kevitra hanombanana ny mety ho voka-dratsin'ity vokatra vaovao ity hita amin'ny famokarana hydrogel HA-BDDE (HA dermal filler) ho an'ny tanjona ara-barotra.Keywords: asidra hyaluronic, HA dermal filler, cross-linked hyaluronic acid, BDDE, LC-MS analysis, BDDE by-product.
Ny famenoana mifototra amin'ny asidra hyaluronic (HA) no famenoana hoditra mahazatra sy malaza indrindra ampiasaina amin'ny tanjona kosmetika.1 Ity famenoana hoditra ity dia hydrogel, matetika ahitana rano> 95% ary 0.5-3% HA, izay manome azy ireo endrika toy ny gel.Ny 2 HA dia polysaccharide ary singa fototra amin'ny matrix extracellular an'ny vertebrates.Iray amin'ireo akora.Izy io dia ahitana (1,4)-glucuronic acid-β (1,3)-N-acetylglucosamine (GlcNAc) miverimberina disaccharide unit mifandray amin'ny glycosidic fatorana.Io lamina disaccharide io dia mitovy amin'ny zavamananaina rehetra.Raha ampitahaina amin'ny famenoana mifototra amin'ny proteinina (toy ny collagen), ity fananana ity dia mahatonga ny HA ho molekiola biocompatible indrindra.Ireo famenoana ireo dia afaka mampiseho ny fizotry ny filaharan'ny asidra amine izay mety ho fantatry ny rafi-piarovan'ny marary.
Rehefa ampiasaina ho famenoana hoditra, ny fetra lehibe indrindra amin'ny HA dia ny fihodinana haingana ao anatin'ny tavy noho ny fisian'ny anzima manokana antsoina hoe hyaluronidases.Hatreto, fanovana simika maro ao amin'ny rafitra HA no voalaza fa hampitombo ny antsasaky ny fiainan'ny HA amin'ny tavy.3 Ny ankamaroan'ireo fanovana ireo dia manandrana mampihena ny fidiran'ny hyaluronidase amin'ny polymère polysaccharide amin'ny alàlan'ny fifamatorana HA.Noho izany, noho ny fiforonan'ny tetezana sy ny intermolecular covalent fatorana eo amin'ny rafitra HA sy ny cross-linking agent, ny cross-linked HA hydrogel mamokatra anti-enzyme vokatra manimba kokoa noho ny voajanahary HA.4-6
Amin'izao fotoana izao, ny simika crosslinking agents ampiasaina mba hamokarana crosslinked HA dia ahitana methacrylamide, 7 hydrazide, 8 carbodiimide, 9 divinyl sulfone, 1,4-butanediol diglycidyl etera (BDDE) ary poly(ethylene glycol) diglycidyl etera.10 ,11 BDDE no tena ampiasaina amin'izao fotoana izao.Na dia efa voaporofo fa azo antoka nandritra ny am-polony taona maro aza ireo karazana hydrogels ireo, dia reagents mihetsiketsika izay mety ho cytotoxic ary, amin'ny tranga sasany, mutagenic.12 Noho izany, ny votoatiny tavela ao amin'ny hydrogel farany dia tsy maintsy avo.Ny BDDE dia heverina ho azo antoka rehefa latsaky ny 2 ampahany isaky ny tapitrisa (ppm) ny fifantohana sisa.4
Misy fomba maromaro hamantarana ny fifantohan'ny BDDE ambany tavela, ny mari-pahaizana mifamatotra ary ny toeran'ny fanoloana ao amin'ny hydrogels HA, toy ny chromatography entona, ny chromatography fanilikilihana habe miaraka amin'ny spectrometry faobe (MS), ny fomba fandrefesana fluorescence nokleary magnetika (NMR), ary Diode array miaraka amin'ny chromatography liquide performance (HPLC).13-17 Ity fanadihadiana ity dia mamaritra ny fitadiavana sy ny famantarana ny vokatra iray ao amin'ny hydrogel HA mifamatotra amin'ny hazo fijaliana farany novokarin'ny fihetsiky ny BDDE sy HA ao anatin'ny toe-javatra alkaline.HPLC sy chromatography ranon-javatra - spectrometry faobe (famakafakana LC-MS).Koa satria tsy fantatra ny poizina amin'ity vokatra avy amin'ny BDDE ity, dia manoro hevitra izahay fa ny fatrany tavela dia tokony hofaritana amin'ny fomba mitovy amin'ny fomba fanao amin'ny BDDE amin'ny vokatra farany.
Ny sira sodium azo avy amin'ny HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japana) dia manana lanjan'ny molekiola ~ 1,368,000 Da (fomba Laurent) 18 ary viscosity intrinsic 2,20 m3 / kg.Ho an'ny fanehoan-kevitra mifamatotra, ny BDDE (≥95%) dia novidina tamin'ny Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, Etazonia).Novidina tao amin'ny Sigma-Aldrich Company ny phosphate buffered saline miaraka amin'ny pH 7.4.Ny solvents rehetra, acetonitrile ary ny rano ampiasaina amin'ny famakafakana LC-MS dia novidina tamin'ny kalitaon'ny HPLC.Ny asidra formic (98%) dia novidina ho kilasy reagent.
Ny fanandramana rehetra dia natao tamin'ny rafitra UPLC Acquity (Waters, Milford, MA, USA) ary mifandray amin'ny API 3000 triple quadrupole mass spectrometer miaraka amin'ny loharano ionization electrospray (AB SCIEX, Framingham, MA, Etazonia).
Natomboka tamin'ny fampidirana 198 mg ny BDDE amin'ny vahaolana 10% (w/w) sodium hyaluronate (NaHA) ny synthesis ny hydrogels HA mifamatotra amin'ny cross-linked amin'ny fisian'ny alkaline 1% (sodium hydroxide, NaOH).Ny fifantohana farany amin'ny BDDE amin'ny fangaro fanehoan-kevitra dia 9.9 mg/mL (0.049 mM).Avy eo, ny fangaro fanehoan-kevitra dia nifangaro tsara sy natao homogène ary navela hiroso amin'ny 45 ° C mandritra ny 4 ora.19 Ny pH amin'ny fanehoan-kevitra dia tazonina amin'ny ~12.
Avy eo dia nosasana tamin'ny rano ny fifangaroan'ny fanehoan-kevitra, ary ny hydrogel HA-BDDE farany dia voasivana sy nolevonina tamin'ny buffer PBS mba hahatratrarana ny haavon'ny HA 10 hatramin'ny 25 mg / mL, ary ny pH farany amin'ny 7.4.Mba hanamafisana ireo hydrogels HA mifamatotra amin'ny hazondamosina, ireo hydrogel rehetra ireo dia atao autoclave (120 ° C mandritra ny 20 minitra).Ny hydrogel BDDE-HA voadio dia voatahiry ao amin'ny 4 ° C mandra-panadihadiana.
Mba handinihana ny BDDE misy ao amin'ny vokatra HA mifamatotra amin'ny hazo fijaliana, dia nolanjaina ny santionany 240 mg ary nampidirina tao amin'ny lavaka afovoany (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, Etazonia; volume 0.5 mL) ary nopetahana tamin'ny 10,000 rpm amin'ny mari-pana amin'ny efitrano. 10 minitra.Ny totalin'ny 20 µL amin'ny rano misintona dia nangonina sy nodinihina.
Mba handinihana ny fenitra BDDE (Sigma-Aldrich Co) eo ambanin'ny fepetra alkaline (1%, 0.1% ary 0.01% NaOH), raha toa ka mahafeno ireto fepetra manaraka ireto, ny santionan'ny rano dia 1:10, 1:100, na hatramin'ny 1:1,000,000 Raha ilaina dia ampiasao ny rano deionized MilliQ hanaovana fanadihadiana.
Ho an'ny fitaovana fanombohana ampiasaina amin'ny fanehoan-kevitra mifamatotra (HA 2%, H2O, 1% NaOH, ary 0,049 mM BDDE), 1 mL isaky ny santionany nomanina avy amin'ireo fitaovana ireo dia nodinihina tamin'ny fampiasana fepetra famakafakana mitovy.
Mba hamaritana ny maha-tokana ny tampon'isa hita ao amin'ny sarintany ion, 10 µL of 100 ppb BDDE standard solution (Sigma-Aldrich Co) dia nampiana ny santionany 20 µL.Amin'ity tranga ity, ny fifantohana farany amin'ny fenitra isaky ny santionany dia 37 ppb.
Voalohany, manomana vahaolana tahiry BDDE miaraka amin'ny fifantohana amin'ny 11,000 mg / L (11,000 ppm) amin'ny alàlan'ny fanalefahana ny 10 μL ny BDDE mahazatra (Sigma-Aldrich Co) miaraka amin'ny rano 990 μL MilliQ (density 1.1 g / mL).Ampiasao ity vahaolana ity hanomanana vahaolana BDDE 110 µg/L (110 ppb) ho toy ny dilution manara-penitra mpanelanelana.Avy eo, ampiasao ny diluent manara-penitra BDDE (110 ppb) hanomanana ny curve manara-penitra amin'ny alàlan'ny fandotoana imbetsaka ny diluent intermediate mba hahazoana ny fifantohana tiana amin'ny 75, 50, 25, 10, ary 1 ppb.Araka ny asehon'ny sary 1, dia hita fa ny curve standard BDDE avy amin'ny 1.1 ka hatramin'ny 110 ppb dia manana linearity tsara (R2> 0.99).Ny curve mahazatra dia naverina tamin'ny fanandramana tsy miankina efatra.
Figure 1 BDDE standard calibration curve azo tamin'ny LC-MS analysis, izay misy fifandraisana tsara (R2> 0.99).
Fanafohezana: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etera;LC-MS, chromatography ranoka ary spectrometry faobe.
Mba hamantarana sy hamaritana ny fenitra BDDE misy ao amin'ny HA mifandray sy ny fenitra BDDE amin'ny vahaolana fototra, dia nampiasaina ny fanadihadiana LC-MS.
Ny fisarahana chromatographic dia tratra tamin'ny tsanganana LUNA 2.5 µm C18 (2) -HST (50 × 2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, Etazonia) ary notazonina tamin'ny mari-pana (25 ° C) nandritra ny fanadihadiana.Ny dingana finday dia ahitana acetonitrile (solvent A) sy rano (solvent B) misy asidra formic 0,1%.Ny dingana finday dia elution amin'ny gradient elution.Ny gradient dia toy izao manaraka izao: 0 minitra, 2% A;1 minitra, 2% A;6 minitra, 98% A;7 minitra, 98% A;7,1 minitra, 2% A;10 minitra , 2% A. Ny fotoana fandehanana dia 10 minitra ary ny habetsahan'ny tsindrona dia 20 µL.Ny fotoana fitazonana ny BDDE dia eo amin'ny 3.48 minitra (manomboka amin'ny 3.43 hatramin'ny 4.14 minitra mifototra amin'ny fanandramana).Ny dingana finday dia nopotehina tamin'ny taham-pidirana 0.25 mL / min ho an'ny fanadihadiana LC-MS.
Ho an'ny famakafakana sy famakafakana BDDE amin'ny MS, ny rafitra UPLC (Waters) dia mitambatra amin'ny API 3000 triple quadrupole mass spectrometer (AB SCIEX) miaraka amin'ny loharano ionization electrospray, ary ny famakafakana dia atao amin'ny fomba ion positive (ESI+).
Araka ny famakafakana ny sombintsombin'ny ion natao tamin'ny BDDE, dia tapa-kevitra ny sombintsombiny miaraka amin'ny hamafin'ny avo indrindra fa ny sombiny mifanaraka amin'ny 129.1 Da (sary 6).Noho izany, amin'ny fomba fanaraha-maso multi-ion (MIM) ho an'ny quantification, ny fiovam-po (mass-to-charge ratio [m / z]) an'ny BDDE dia 203.3 / 129.1 Da.Izy io koa dia mampiasa fomba scan feno (FS) sy fomba scan ion vokatra (PIS) ho an'ny famakafakana LC-MS.
Mba hanamarinana ny maha-manokana ny fomba, dia nisy santionany tsy misy na inona na inona (dingana finday voalohany).Tsy nisy famantarana hita tao amin'ny santionany banga miaraka amin'ny fiovam-po 203.3 / 129.1 Da.Mikasika ny fiverimberenan'ny fanandramana, ny tsindrona 10 mahazatra amin'ny 55 ppb (eo afovoan'ny curve calibration) dia nodinihina, ka nahatonga ny fivilian-dàlana sisa tavela (RSD) <5% (data tsy aseho).
Ny votoatin'ny BDDE sisa tavela dia nofaritana tamin'ny hydrogels HA mifandray amin'ny autoclaved BDDE samihafa, mifanaraka amin'ny fanandramana tsy miankina efatra.Araka ny voalaza ao amin'ny fizarana "Ny fitaovana sy ny fomba", ny quantification dia tombanana amin'ny salan'isa salan'isa amin'ny curve regression ny BDDE dilution fenitra, izay mifanitsy amin'ny tampony tsy manam-paharoa hita ao amin'ny BDDE tetezamita faobe ny 203.3 / 129.1 Da, miaraka amin'ny fihazonana. fotoana 3.43 hatramin'ny 4.14 minitra Tsy miandry.Ny sary 2 dia mampiseho krômatograma ohatra amin'ny fenitry ny fanondroana 10 ppb BDDE.Ny tabilao 1 dia mamintina ny votoatin'ny BDDE sisa amin'ny hydrogels valo samihafa.Ny sandany dia 1 hatramin'ny 2.46 ppb.Noho izany, ny fifantohana BDDE sisa tavela amin'ny santionany dia azo ekena amin'ny fampiasana olombelona (<2 ppm).
Figure 2 Ion chromatogram of 10 ppb BDDE reference standard (Sigma-Aldrich Co), MS (m / z) tetezamita azo avy amin'ny LC-MS fanadihadiana ny 203.30 / 129.10 Da (amin'ny fomba MRM tsara).
Fanafohezana: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etera;LC-MS, chromatography ranoka ary spectrometry faobe;MRM, fanaraha-maso fanehoan-kevitra maro;MS, faobe;m/z, tahan'ny faobe amin'ny fiampangana.
Fanamarihana: Ny santionany 1-8 dia autoclaved BDDE cross-linked HA hydrogels.Ny habetsaky ny BDDE sisa tavela ao amin'ny hydrogel sy ny tampon'ny fotoana fihazonana BDDE dia voalaza ihany koa.Farany, voalaza ihany koa ny fisian'ny tampon'isa vaovao miaraka amin'ny fotoana fitehirizana samihafa.
Fanafohezana: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etera;HA, asidra hyaluronic;MRM, fanaraha-maso fanehoan-kevitra maro;tR, fotoana fihazonana;LC-MS, chromatography ranoka ary spectrometry faobe;RRT, fotoana fihazonana.
Mahagaga fa ny famakafakana ny LC-MS ion chromatogram dia nampiseho fa mifototra amin'ny autoclaved cross-linked santionany hydrogel HA hydrogel nodinihina, dia nisy tampon'isa fanampiny tamin'ny fotoana fihazonana fohy kokoa amin'ny 2.73 hatramin'ny 3.29 minitra.Ohatra, ny sary 3 dia mampiseho ny chromatograma ion amin'ny santionany HA mifamatotra amin'ny hazo fijaliana, izay misy tampon'isa fanampiny miseho amin'ny fotoana fitehirizana hafa eo amin'ny 2,71 minitra eo ho eo.Ny fe-potoana fitazonana (RRT) hita eo anelanelan'ny tampon'ny tampon'ny BDDE dia hita fa 0.79 (Table 1).Satria fantatsika fa ny tampon'ny tampony vao hita dia tsy voatazona ao amin'ny tsanganana C18 ampiasaina amin'ny famakafakana LC-MS, ny tendrony vaovao dia mety mifanaraka amin'ny fitambarana polar kokoa noho ny BDDE.
Figure 3 Ion chromatogram of cross-linked HA hydrogel sample azo avy amin'ny LC-MS (MRM mass fiovam-po 203.3/129.0 Da).
Fanafohezana: HA, asidra hyaluronic;LC-MS, chromatography ranoka ary spectrometry faobe;MRM, fanaraha-maso fanehoan-kevitra maro;RRT, fotoana fihazonana akaiky;tR, fotoana fihazonana.
Mba hialana amin'ny mety hisian'ny tampon'isa vaovao voamarika dia mety ho loto misy tany am-boalohany ao amin'ny akora ampiasaina, dia nodinihina ihany koa ireo akora ireo tamin'ny alàlan'ny fomba famakafakana LC-MS mitovy.Ny fitaovana fanombohana nodinihina dia ahitana rano, 2% NaHA amin'ny rano, 1% NaOH ao anaty rano, ary BDDE amin'ny fifantohana mitovy amin'ny fampiasana amin'ny fanehoan-kevitra mifamatotra.Ny chromatograma ion amin'ny fitaovana fanombohana ampiasaina dia tsy nampiseho fitambarana na tampon'isa, ary ny fotoana fitehirizana azy dia mifanandrify amin'ny tampony vaovao voamarika.Ity zava-misy ity dia manilika ny hevitra fa tsy ny akora fanombohana ihany no mety ahitana fitambarana na akora mety hanelingelina ny fomba famakafakana, fa tsy misy famantarana ny mety hisian'ny fandotoana amin'ny vokatra laboratoara hafa.Ny sandan'ny fifantohana azo taorian'ny famakafakana LC-MS momba ny BDDE sy ny tampony vaovao dia aseho ao amin'ny tabilao 2 (santionany 1-4) ary ny chromatogram ion amin'ny sary 4.
Fanamarihana: Ny santionany 1-4 dia mifanaraka amin'ny akora ampiasaina amin'ny famokarana autoclaved BDDE cross-linked HA hydrogels.Ireo santionany ireo dia tsy natao autoclave.
Fanafohezana: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etera;HA, asidra hyaluronic;LC-MS, chromatography ranoka ary spectrometry faobe;MRM, fanaraha-maso fanehoan-kevitra maro.
Ny sary 4 dia mifanitsy amin'ny krômatograma LC-MS amin'ny santionan'ny akora ampiasaina amin'ny fanehoan-kevitry ny HA sy ny BDDE.
Fanamarihana: Ireo rehetra ireo dia refesina amin'ny fifantohana sy ny tahan'ny mitovy ampiasaina hanatanterahana ny fanehoan-kevitra mifamatotra.Ny isa ho an'ny akora famakafakana amin'ny chromatogram dia mifanaraka amin'ny: (1) rano, (2) 2% HA vahaolana rano, (3) 1% NaOH vahaolana.Ny famakafakana LC-MS dia natao ho an'ny fiovam-po faobe amin'ny 203.30/129.10 Da (amin'ny fomba MRM tsara).
Fanafohezana: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etera;HA, asidra hyaluronic;LC-MS, chromatography ranoka ary spectrometry faobe;MRM, fanaraha-maso fanehoan-kevitra maro.
Nodinihina ny fepetra nahatonga ny fananganana tampon'isa vaovao.Mba handinihana ny fiantraikan'ny fepetra fanehoan-kevitra ampiasaina amin'ny famokarana ny hydrogel HA mifandray amin'ny cross-linked amin'ny fihetsiky ny BDDE cross-linking agent, izay mitarika amin'ny fananganana tampony vaovao (azo atao amin'ny vokatra), dia natao ny fandrefesana samihafa.Tao anatin'ireo fanapahan-kevitra ireo, dia nandinika sy nandinika ny crosslinker BDDE farany izahay, izay nokarakaraina tamin'ny fifantohana samihafa amin'ny NaOH (0%, 1%, 0.1%, ary 0.01%) amin'ny medium aqueous, arahin'ny autoclaving na tsy misy.Ny fomba fiasa bakteria amin'ny fanaovana simulation ny fepetra mitovy dia mitovy amin'ny fomba ampiasaina amin'ny famokarana ny hydrogel HA mifamatotra.Araka ny voalaza ao amin'ny fizarana "Materials sy Methods", ny fiovan'ny faobe amin'ny santionany dia nodinihina tamin'ny LC-MS ho 203.30 / 129.10 Da.Ny BDDE sy ny fifantohana amin'ny tampony vaovao dia kajy, ary ny valiny dia aseho ao amin'ny tabilao 3. Tsy misy tampony vaovao hita ao amin'ny santionany izay tsy autoclaved, na inona na inona ny fisian'ny NaOH ao amin'ny vahaolana (samples 1-4, Table). 3).Ho an'ny santionany autoclaved, ny tendrony vaovao dia tsy hita afa-tsy amin'ny fisian'ny NaOH ao amin'ny vahaolana, ary ny fananganana ny tendrony dia toa miankina amin'ny fifantohana NaOH amin'ny vahaolana (samples 5-8, Table 3) (RRT = 0.79).Ny sary 5 dia mampiseho ohatra iray amin'ny chromatograma ion, mampiseho santionany roa autoclaved amin'ny fisiana na tsy fisian'ny NAOH.
Fanafohezana: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etera;LC-MS, chromatography ranoka ary spectrometry faobe;MRM, fanaraha-maso fanehoan-kevitra maro.
Fanamarihana: Ny chromatogram ambony: Ny santionany dia notsaboina tamin'ny 0,1% NaOH vahaolana rano ary autoclaved (120 ° C nandritra ny 20 minitra).Krômatograma ambany: Ny santionany dia tsy notsaboina tamin'ny NaOH, fa natao autoclave tamin'ny fepetra mitovy.Ny fiovam-po faobe amin'ny 203.30 / 129.10 Da (amin'ny fomba MRM tsara) dia nodinihina tamin'ny LC-MS.
Fanafohezana: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etera;LC-MS, chromatography ranoka ary spectrometry faobe;MRM, fanaraha-maso fanehoan-kevitra maro.
Ao amin'ny santionany autoclaved rehetra, miaraka amin'ny NaOH na tsy misy, ny fifantohana BDDE dia nihena be (hatramin'ny in-16.6) (samples 5-8, Table 2).Ny fihenan'ny fifantohana BDDE dia mety ho noho ny zava-misy fa amin'ny hafanana ambony, ny rano dia afaka miasa toy ny fototra (nucleophile) hanokafana ny peratra epoxide an'ny BDDE mba hamorona fitambarana 1,2-diol.Ny kalitao monoisotopic an'io fitambarana io dia tsy mitovy amin'ny an'ny BDDE ary noho izany dia tsy hisy fiantraikany.Ny LC-MS dia nahita fiovàna faobe 203.30/129.10 Da.
Farany, ireo fanandramana ireo dia mampiseho fa ny famokarana tampon'isa vaovao dia miankina amin'ny fisian'ny BDDE, NAOH, ary ny fizotran'ny autoclaving, fa tsy misy ifandraisany amin'ny HA.
Ny tampon'isa vaovao hita tamin'ny fotoana fitehirizana eo amin'ny 2.71 minitra dia nasehon'ny LC-MS avy eo.Ho an'ity tanjona ity, ny BDDE (9.9 mg / mL) dia natsipy tao anaty rano 1% NaOH ary nodiovina.Ao amin'ny tabilao 4, ny toetran'ny tampon'isa vaovao dia ampitahaina amin'ny tampon'isan'ny BDDE fantatra (fotoana fitazonana eo amin'ny 3.47 minitra).Mifototra amin'ny famakafakana ny fizarazaran'ny ion amin'ny tendrony roa, dia azo tsoahina fa ny tendrony miaraka amin'ny fotoana fitehirizana ny minitra 2.72 dia mampiseho sombiny mitovy amin'ny tampon'ny BDDE, saingy amin'ny hery samihafa (sary 6).Ho an'ny tampon'isa mifanandrify amin'ny fotoana fitehirizana (PIS) 2.72 minitra, dia nisy tampony mahery kokoa hita taorian'ny fisarahana tamin'ny faobe 147 Da.Ao amin'ny fifantohana BDDE (9.9 mg / mL) ampiasaina amin'ity fanapahan-kevitra ity, dia voamarika ihany koa ny maodely absorbance samihafa (UV, λ = 200 nm) ao amin'ny spectrum ultraviolet taorian'ny fisarahana chromatographic (sary 7).Mbola hita amin'ny 200 nm ny tampon'isa misy fe-potoana fitazonana 2.71 minitra, raha tsy azo jerena ao amin'ny chromatograma ny tampon'ny BDDE amin'ny fepetra mitovy.
Tabilao 4 Ny valin'ny famaritana ny tampony vaovao miaraka amin'ny fotoana fitazonana eo amin'ny 2.71 minitra ary ny tampon'ny BDDE miaraka amin'ny fotoana fitazonana 3.47 minitra
Fanamarihana: Mba hahazoana ireo valiny ireo, dia natao ny fanadihadiana LC-MS sy HPLC (MRM sy PIS) teo amin'ireo tendrony roa.Ho an'ny famakafakana HPLC dia ampiasaina ny fitiliana UV miaraka amin'ny halavan'ny onjam 200 nm.
Fanafohezana: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etera;HPLC, chromatography ranon-javatra avo lenta;LC-MS, chromatography ranoka ary spectrometry faobe;MRM, fanaraha-maso fanehoan-kevitra maro;m/z, tahan'ny faobe amin'ny fiampangana;PIS, scanning Ion vokatra;taratra ultraviolet, taratra taratra ultraviolet.
Fanamarihana: Ny ampahany betsaka dia azo avy amin'ny LC-MS analysis (PIS).Krômatograma ambony: spektrum faobe amin'ny sombiny santionany mahazatra BDDE.Krômatograma ambany: Ny spektrum faobe amin'ny tendrony vaovao hita (RRT mifandray amin'ny tampon'ny BDDE dia 0.79).Ny BDDE dia nokarakaraina tamin'ny vahaolana NaOH 1% ary natao autoclaved.
Fanafohezana: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etera;LC-MS, chromatography ranoka ary spectrometry faobe;MRM, fanaraha-maso fanehoan-kevitra maro;PIS, vokatra ion scan;RRT, fotoana fihazonana.
Figure 7 Ion chromatogram of the 203.30 Da precursor ion, ary (A) ny tampon'isa vaovao miaraka amin'ny fotoana fihazonana 2.71 minitra ary (B) ny fahitana UV ny tampon'ny fenitra BDDE amin'ny 3.46 minitra amin'ny 200 nm.
Ao amin'ny hydrogels HA mifamatotra amin'ny hazondamosina rehetra novokarina, dia hita fa ny fifantohana BDDE sisa tavela taorian'ny fampitomboana ny LC-MS dia <2 ppm, saingy nisy tampon'isa vaovao tsy fantatra niseho tamin'ny fanadihadiana.Ity tendrony vaovao ity dia tsy mifanaraka amin'ny vokatra mahazatra BDDE.Ny vokatra manara-penitra BDDE ihany koa dia nandalo ny fiovam-po mitovy amin'ny kalitao (MRM fiovam-po 203.30/129.10 Da) amin'ny fomba MRM tsara.Amin'ny ankapobeny, ny fomba famakafakana hafa toy ny chromatography dia ampiasaina ho fitsapana fetra hamantarana ny BDDE amin'ny hydrogels, fa ny fetra farany indrindra (LOD) dia ambany kely noho ny 2 ppm.Amin'ny lafiny iray, hatramin'izao, ny NMR sy MS dia nampiasaina mba hamaritana ny haavon'ny fifamatorana sy / na fanovana ny HA ao amin'ny sombin-tsakafo siramamy amin'ny vokatra HA mifamatotra.Ny tanjon'ireo teknika ireo dia tsy ny hamantatra ny BDDE sisa tavela amin'ny fifantohana ambany toy ny voalaza ato amin'ity lahatsoratra ity (LOD amin'ny fomba LC-MS = 10 ppb).
Fotoana fandefasana: Sep-01-2021